■ アレルゲン物質の分析の簡易法はありますか？
| アレルギーとは、体に進入した異物を排除して体を守るための仕組み(免疫）が過剰に働き、逆に体に不具合を生じさせることである。アレルギー反応は肥満細胞に結合している抗体がアレルゲンと結合し、そのアレルゲンと結合した肥満細胞がさまざまな物質を放出する。それによってアレルギーが発生するのである。 日本ハム㈱中央研究所が開発したELISA法が簡易公定法として有名です。 発売元は和光純薬となっている。 ＥＬＩＳＡ法とは Ｅｎｚｙｍｅ Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｎｏｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙの略ですが、抗原抗体反応を利用しタンパク質の濃度を測定する方法である。 測定範囲は０～１００μｇ／ｍｌとしているが、上限は１００μｇ／ｍｌを超える場合は２０ｐｐｍ以上と表記する。 生体内では、異物を排除するために、血中のＢ細胞（白血球の一種）から産生されるタンパク質である抗体が異物を攻撃（結合して、無害化する）する。しかし、そのあとはマクロファージが食べてしまう。 ■キットの構成は以下のようになります。 ①抗体固相化プレート－－－－小麦のタンパク質を結合する抗体を結合させたプレート ②標準溶液－－－－－濃度が測定してある小麦タンパク質の溶液 ③希釈緩衝液 ④ビオチン結合抗体－－－－小麦タンパク質と結合する抗体にビオチンを結合させたもの。 ⑤酵素－－－－ペルオキシダーゼ－アビジン結合物､酵素とアビジンが結合したものです。アビジンはビオチンと親和性が高く、ビオチンに結合する。 ⑥発色剤－－－－ＴＭＢの溶液です。ＴＭＢがペルオキシダーゼと反応することにより、青色を呈す。 ⑦反応停止液－－－－ＴＭＢとペルオキシターゼの反応を停止する溶液です。１Ｍの硫酸である。 ⑧濃縮洗浄液－－－－抗原抗体反応、その他結合反応の後、不純物を取り除くための洗浄液である。 ■キットでの操作の簡単なながれ 測定溶液の調整(食品サンプルの粉砕・均一化、抽出操作、遠心分離、ろ過) ↓ 試薬類の準備（プレートの準備、標準溶液の希釈等） ↓ 標準溶液および検体の添加 ↓ 一時間反応させたあと洗浄 ↓ ビオチン結合抗体の添加 ↓ 一時間反応させたあと洗浄 ↓ 酵素－アビジン結合物の添加 ↓ ３０分反応させたあと洗浄 ↓ 発色剤の添加 ↓ 吸光度測定 |